【實踐能力】護考實踐能力之酶活性測定方法

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　　酶活性測定方法

　　1.按反應時間分類法：

　　20世紀50年代以前大都使用固定時間法。這種方法是以酶催化反應的平均速度來計算酶的活性，現多已不用。50年代中期開始采用連續監測法。這種方法用自動生化分析儀上完成，可以測酶反應的初速度，其結果遠比固定時間法準確，在高濃度標本尤為明顯，但本法也受到反應時間，反應溫度，試劑等的影響，應加以注意。

　　(1)定時法：(兩點法)

　　通過測定酶反應開始后某一時間段內(t1到t2)產物或底物濃度的總變化量來求取酶反應初速度的方法。其中t1往往取反應開始的時間。

　　酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間，通過加入強酸、強堿、蛋白沉淀劑等，使反應完全停止(也叫中止反應法)。加入試劑進入化學反應呈色測出底物和產物的變化。

　　該法最基本的一點是停止反應后才測定底物或物的變化。

　　優點：簡單易行，對試劑要求不高。

　　缺點：難保證測定結果的真實性。

　　難以確定反應時間段酶促反應是否處于線性期。隨著保溫時間的延續，酶變性失活加速。

　　(2)連續監測法：又稱為動力學法或速率法、連續反應法。

　　在酶反應過程中，用儀器監測某一反應產物或底物濃度隨時間的變化所發生的改變，通過計算求出酶反應初速度。

　　連續監測法根據連續測得的數據，可選擇線性期的底物或產物變化速率用于計算酶活力。

　　因此連續監測法測定酶活性比定時法更準確。

　　實際工作中，采用工具酶的酶耦聯法已經成為應用最廣、最頻繁測酶活性濃度的方法。

　　(3)平衡法：通過測定酶反應開始至反應達到平衡時產物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法，又叫終點法。

　　2.按檢測方法分類法：

　�、俜止夤舛确�;②旋光法;③熒光法;④電化學方法;⑤化學反應法;⑥核素測定法;⑦量熱法。

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（編輯：廣東華圖）